КУЛЬТИВИРОВАНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ИЗ КОСТНОГО МОЗГА ПАЦИЕНТОВ С ОРТОПЕДИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ
Н.М. АСТАХОВА1,2, А.В. КОРЕЛЬ1, К.Е. ОРИЩЕНКО3, Я.Р. ЕФРЕМОВ3,4, Г.А. КУДРОВ1, И.А. КИРИЛОВА1
1Новосибирский НИИ травматологии и ортопедии им. Я.Л. Цивьяна Минздрава России NAstakhova@niito.ru 2АО «Инновационный медико-технологический центр (Медицинский Технопарк)» 3ФИЦ «Институт цитологии и генетики» СО РАН OrishchenkoKE@icg.sbras.ru 4Новосибирский государственный университет yarex@bionet.nsc.ru
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки, костный мозг, диспластический коксоартроз, митотический индекс, скорость миграции, дифференцировка, регенерация кости и хряща
Страницы: 38-46
Аннотация
В статье приведены данные по культивированию и характеристике мезенхимальных стромальных клеток (МСК), выделенных из костного мозга пациентов с диспластическим коксартрозом. Во фракции адгезивных МСК из обоих образцов костного мозга выявлено несколько морфологических фенотипов: веретенообразные удлиненные клетки, большие уплощенные клетки и тонкие звездчатые клетки. Иммунофенотипический анализ показал, что по характеру и уровню экспрессии поверхностных антигенов (CD90, CD73, CD105, CD45 и CD34) клетки представляют собой популяции МСК. Использование для культивирования МСК человека новой ростовой среды, не содержащей компонентов животного происхождения, позволяет МСК достигать конфлюэнтности на 16-18 день инкубации, без замедления пролиферативной активности клеток и без потери способности к дифференцировке в хондро- и остеогенные типы тканей. Мультипотентность МСК подтверждена остеогенной и хондрогенной дифференцировкой клеток при их длительном культивировании в соответствующих индукционных средах in vitro . Дифференцировку МСК в остеобласты подтверждали иммуноцитохимическим окрашиванием на щелочную фосфатазу и ализариновым красным. Специфическую дифференцировку МСК по хондрогенному типу выявляли иммуноцитохимическим окрашиванием хрящевых депозитов альциановым синим. Впервые определены такие характеристики МСК человека, как митотический индекс, траектории и средняя скорость движения клеток на культуральном пластике. Митотический индекс активно пролиферирующих МСК составил от 2,7 до 3,4 % от общего количества клеток, двигательная активность (скорость миграции) - 38-42 мкм/ч. Таким образом, аспират костного мозга от пациентов с ортопедической патологией является источником МСК, которые удовлетворяют критериям, определенным Международным обществом клеточной терапии, и могут быть использованы в регенеративной терапии костной и хрящевой тканей.
http://sibmed.net/article/578/snmzh_1-2018_astahova_i_dr.pdf
DOI: 10.15372/SSMJ20180106 |