АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА ИСКУССТВЕННОГО ПОЛИЭПИТОПНОГО ВИЧ-ИММУНОГЕНА
А.П. РУДОМЕТОВ1, Н.Б. АНДРЕЕВА1, А.Н. ЧИКАЕВ2, Н.С. ЩЕРБАКОВА1, О.Н. КАПЛИНА1, Л.И. КАРПЕНКО1
1Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора
rudometov_ap@vector.nsc.ru
2Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН
chikaev@ngs.ru
Ключевые слова: ВИЧ-1, полиэпитопные ВИЧ-иммуногены, эпитопы, нейтрализующие антитела широкого спектра действия, bNAbs
Страницы: 37-43
Подраздел: Медико-биологические науки
Аннотация
Создание иммуногена, способного обеспечить защиту от заражения и развития ВИЧ-инфекции, до сих пор является нерешенной и актуальной задачей. Поскольку для ВИЧ-1 характерна сильная генетическая изменчивость, эффективная вакцина должна обеспечивать защиту от множества различных штаммов вируса. Решением проблемы могло бы стать создание иммуногена, способного индуцировать ВИЧ-нейтрализующие антитела широкого спектра действия (bNAbs). В отличие от обычных антител, bNAbs реагируют с консервативными эпитопами, обеспечивая защитный иммунитет против подавляющего большинства штаммов ВИЧ. Целью исследования являлось конструирование и анализ антигенных свойств полиэпитопного ВИЧ-иммуногена, включающего в свой состав эпитопы, узнаваемые bNAbs. Материал и методы. В качестве молекулы-носителя использован созданный ранее белок TBI, на основе которого был получен его модифицированный вариант - nTBI. В его состав вошли эпитопы, узнаваемые bNAbs 10E8, 4E10, 2F5, а также линейный миметик конформационного эпитопа bNAb VRC01. Анализ антигенных свойств эпитопов в составе nTBI проводили с помощью иммуноблотинга. Для очистки nTBI использовали металл-хелатную хроматографию. Для оценки иммуногенных свойств nTBI проводили иммунизацию кроликов очищенным препаратом и определяли специфическую активность их сывороток с помощью ИФА. IgG из сывороток кроликов получали путем аффинной хроматографии на белке A. Вируснейтрализующую активность очищенных IgG определяли в реакции нейтрализации с использованием рекомбинантного вируса ВИЧ-1 92BR025. Результаты. Сконструирован иммуноген nTBI, содержащий эпитопы, узнаваемые bNAbs. Получен продуцент белка nTBI, обеспечивающий выход целевого белка до 30 % от суммы клеточных белков продуцента. Показано, что, находясь в контексте белка nTBI, линейные эпитопы сохраняют свои антигенные свойства. При иммунизации кроликов nTBI индуцирует образование антител, способных нейтрализовать рекомбинантный штамм ВИЧ-1 92BR025. Заключение. Показана принципиальная возможность использования искусственного белка TBI в качестве каркасной молекулы для экспонирования эпитопов, узнаваемых широко нейтрализующими антителами.
http://sibmed.net/article/614/snmzh_4-2018_rudometov_i_dr.pdf
DOI: 10.15372/SSMJ20180405 |
