ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ХИМЕРНОЙ ФОРМЫ РЕКОМБИНАНТНОГО ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА
М.Б. ПЫХТИНА1,2, В.П. РОМАНОВ1, С.М. МИРОШНИЧЕНКО1,2, А.Б. БЕКЛЕМИШЕВ1
1НИИ биохимии ФИЦ фундаментальной и трансляционной медицины
pykhtina_maria@mail.ru
2НИИ лимфологии ФИЦ «Институт цитологии и генетики СО РАН»
Ключевые слова: G-CSF человека, apoA-I, клонирование, химерный ген, Pichia pastoris X-33, ионообменная хроматография, клетки костного мозга, проточная цитометрия, human G-CSF, apoA-I, cloning, chimeric gene, Pichia pastoris X-33, ion exchange chromatography, bone marrow cells, flow cytometry
Страницы: 37-45
Аннотация
Цель исследования - получение и изучение биологических свойств рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека (G-CSF), «сшитого» посредством пептидного линкера с аполипопротеином А-I (apoA-I), для разработки в перспективе на его основе цитокина пролонгированного действия. Материал и методы. Нуклеотидные последовательности генов G-CSF и apoA-I были оптимизированы для экспрессии в дрожжах Pichia pastoris. Сборку гена, кодирующего химерный цитокин G-CSF-аpoA-I, его клонирование в составе вектора pPICZα-A и экспрессию в клетках P. pastoris выполняли с использованием стандартных генно-инженерных методов. Полученный цитокин очищали методом двухступенчатой ионообменной хроматографии. Биологическую активность химеры определяли in vitro на клетках костного мозга (ККМ) крысы и человека с применением методов проточной цитометрии, анализа клеточного цикла и миелограмм. Результаты. Сконструирован рекомбинантный штамм дрожжей P. pastoris Х-33, продуцирующий химерный цитокин, содержащий с N-конца аминокислотную последовательность G-CSF, а с С-конца - зрелого apoA-I человека. На ККМ крыс показано, что G-CSF-аpoA-I в 1,8-2 раза менее эффективно увеличивает количество гранулоцитов, чем G-CSF. Вместе с тем химерный цитокин поддерживал жизнеспособность клеток моноцитарного и лимфоцитарного ряда и так же, как G-CSF, поддерживал пролиферацию и созревание клеток гранулоцитарного ряда. В отличие от G-CSF, химера повышала количество бластных клеток и нормализовала сегментацию нейтрофилов, в 1,5 раза эффективнее снижая количество аномалий. Заключение. Сконструирован новый химерный цитокин G-CSF-аpoA-I, проявляющий свойства не только колониестимулирующего, но и ростового фактора, поддерживающего жизнеспособность других типов ККМ.
http://sibmed.net/article/770/snmzh_6-2019_pyhtina.pdf
DOI: 10.15372/SSMJ20190605 |
