ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ АДВЕНТИВНЫХ МИКРОПОБЕГОВ PICEA PUNGENS ENGELM. С ПОМОЩЬЮ ДНК-МАРКЕРОВ И ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ
Т.В. Железниченко1, Д.С. Мурасева1, С.В. Асбаганов1, М.С. Воронкова1, А.В. Заушинцена2, Т.И. Новикова1
1Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, Новосибирск, Россия
zhelez05@mail.ru
2Кемеровский государственный университет, Кемерово, Россия
alexaz58@yandex.ru
Ключевые слова: культура in vitro, регенерация микропобегов, тидиазурон, ISSR- и RAPD-анализ, проточная цитометрия, ель колючая, in vitro culture, microshoots regeneration, thidiazuron, ISSR and RAPD analysis, flow cytometry, blue spruce
Страницы: 45-54
Аннотация
Впервые исследовали генетическую вариабельность/стабильность микропобегов ели колючей Picea pungens Engelm., полученных в культуре in vitro путем прямой регенерации из зиготических зародышей под действием синтетического регулятора роста с цитокининовой активностью N-фенил-N′-1, 2, 3-тидиазурол-5-мочевины, или тидиазурона (ТДЗ), с помощью ISSR- и RAPD-анализов, а также методом проточной цитометрии. Побегообразование индуцировали на среде ½ LV, используя две концентрации ТДЗ (0.5 или 1 мкмоль) в течение 28 сут, затем растительный материал переносили на безгормональную питательную среду ½ LV на 35 сут. Сформировавшиеся микропобеги отделяли от тканей экспланта и культивировали на безгормональных средах того же состава еще один пассаж (35 сут), затем оценивали их генетическую стабильность. Для оценки влияния каждой концентрации регулятора роста на стабильность генома использовали микропобеги, образованные тремя разными генотипами растений-доноров. С помощью ISSR-анализа выявлен незначительный полиморфизм между микропобегами ели колючей, образованными у одного генотипа с помощью молекулярно-генетического анализа. Показано, что генетическая вариабельность регенерантов у отдельных генотипов составляла от 1.29 до 1.58 %, в то время как у других генотипов сохранялась 100 % генетическая стабильность микропобегов. В то же время RAPD-анализ не показал различий между анализируемыми образцами, все исследуемые праймеры инициировали мономорфные спектры. Методом проточной цитометрии установлено, что все исследованные образцы были диплоидными. Содержание ДНК (2С) в микропобегах варьировало от (38.86 ± 0.55) до (40.35 ± 0.30) пг, а размер генома (1С) (18 961.79 ± 256.91) - (19 933.27 ± 526.35) млн п. н. Полученные результаты свидетельствуют о низком уровне сомаклональной изменчивости микропобегов ели колючей, образованных in vitro в результате прямой регенерации из зиготических зародышей под действием исследуемых концентраций ТДЗ.
DOI: 10.15372/SJFS20200406 |
